活性氧(ROS)检测试剂盒（红色荧光）
更新：2023-10-11 9:16:43
| 中文名： | 活性氧(ROS)检测试剂盒（红色荧光） | 说明书下载 | 暂无 |
| 英文名： | Reactive Oxygen Species Assay Kit | ||
| 描述： | 活性氧检测试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）利用荧光探针 DHE 进行活性氧检测。DHE 可自由透过活细胞膜进入细胞内，在细胞质中呈蓝色荧光，被细胞内的 ROS 氧化后形成氧化乙啶掺入染色体 DNA 中，使细胞核呈现明亮的红色荧光。在激发波长 535nm，发射波长 610nm 附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、 荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光强度，测定细胞内活性氧水平。具有背景低、灵敏度高、线性范围宽、使用方便等优点，是一种快速简便的组织或培养活细胞中 ROS 经典检测方法。 | ||
| 货号 | 规格 | 价格 | 品牌 |
| G2706-1 | 0.2ml | 520 | GBCBIO |
| G2706-2 | 0.5ml | 960 | GBCBIO |
| G2706-3 | 1ml | 1580 | GBCBIO |
| 产品简介： 活性氧检测试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）利用荧光探针 DHE 进行活性氧检测。DHE 可自由透过活细胞膜进入细胞内，在细胞质中呈蓝色荧光，被细胞内的 ROS 氧化后形成氧化乙啶掺入染色体 DNA 中，使细胞核呈现明亮的红色荧光。在激发波长 535nm，发射波长 610nm 附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、 荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光强度，测定细胞内活性氧水平。具有背景低、灵敏度高、线性范围宽、使用方便等优点，是一种快速简便的组织或培养活细胞中 ROS 经典检测方法。 产品特点： 适用范围：贴壁细胞、悬浮细胞、新鲜动物组织 工作波长：最佳激发波长 480-535nm，最佳发射波长 590-610nm 所需设备：流式细胞仪、荧光酶标仪、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计等 储存和稳定性: -20℃避光冻存。本试剂盒自订购之日起一年内有效。 试剂盒组成: 货号 G2706-1 G2706-2 G2706-3 DHE Solution(5mM) 0.2ml 0.5ml 1ml 说明书 1份 1份 1份 注意事项： 开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集于管底，避免开盖时染液损失。 要设有无DHE孵育的对照，即不加探针，只用0.01M PBS重悬的细胞。 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，以避免背景升高。多次清洗时注意操作规范，避免将细胞洗掉。 对于药物处理（孵育）时间较短的细胞（2小时以内、也有建议 4小时以内），可以先用荧光染料进行标记，后用药物刺激细胞后。对于药物处理时间较长的细胞（超过 4 小时或 6 小时以上），建议先用药物处理（刺激）细胞，后用探针标记。 DHE 在光照和空气中易被氧化，保存和操作中应注意避光。 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察ROS的变化。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作 使用说明： 一、细胞样本： A：收集细胞，进行活性氧测定 1 细胞收集： 悬浮细胞：2000rpm，离心5min，收集沉淀，用 0.01M PBS 或无血清培养液洗涤2次，1000rpm，离心5min，弃上清，取细胞沉淀； 贴壁细胞：吸去培养液，用0.01M PBS 或无血清培养液反复吹打，使细胞层全部进入PBS 或培养液中，收集细胞悬液，用0.01M PBS 或无血清培养液洗涤2次，1000rpm，离心5min，弃上清，取细胞沉淀； 2 加入DHE探针：用稀释好的 DHE荧光探针重悬细胞沉淀，一般情况下，细胞密度要求1*106-2*107/ml，推荐探针初始工作浓度为10 μM（DHE 工作浓度可在 1μM~100 μM 范围内，需进行预实验确定最适浓度）。 3 37 ℃孵育细胞10-90分钟。通常情况下，10-30分钟即可。 注意：孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DHE 浓度等有关。可以每隔5min颠倒混匀一下，使探针与样本充分接触。 4 1000g，离心5min，去上清收集细胞沉淀，用 PBS 缓冲液洗涤 2 次，重悬细胞。 5 进行荧光检测，以荧光度数值表示结果。 B：不收集细胞，直接将探针加入培养基测定
1. 加入DHE探针：去除细胞培养基上清，加入用无血清培养液稀释好的 DHE 探针（推荐探针终浓度为 10 μM），加入探针的体积以能盖住细胞为宜，通常 6 孔板单孔不少于 500 μl。 2. 37℃孵育细胞10-90分钟。通常情况下，10-30 分钟即可。 注意：孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DHE 浓度等有关。可以每隔 5min 颠倒混匀一下，使探针与样本充分接触。 3. 弃去上层培养液，用无血清培养液或0.01M PBS反复吹打，使细胞层全部进入PBS或培养液中。 4. 收集细胞悬液，用 0.01M PBS 或无血清培养液洗涤 2 次，去除未进入细胞内的探针，1000rpm，离心5min，弃上清，收集细胞沉淀，用PBS缓冲液洗涤2次，重悬细胞。 5. 进行荧光检测，以荧光度数值表示结果。 二、动物组织样本
1. 细胞悬液制备：可采用单细胞悬液制备仪或传统的组织处理方法如：酶解法、研磨法等制备单细胞悬液； 2. 加入DHE探针：去除细胞培养基上清，加入用无血清培养液稀释好的 DHE探针（推荐探针终浓度为 10 μM）。 3. 37℃孵育细胞10-90分钟。通常情况下，10-30分钟即可。 注意：孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DHE 浓度等有关。可以每隔 5min 颠倒混匀一下，使探针与样本充分接触。1000g，离心5min，去上清收集细胞沉淀，用PBS缓冲液洗涤2次，重悬细胞。 4. 进行荧光检测，以荧光度数值表示结果。 |